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質譜儀與其他技術的結合

發(fā)布時間:2022-07-12       點擊次數(shù):5800

質譜儀與其他技術的結合:液相色譜(LC),氣相色譜(GC),毛細管電泳(CE)和凝膠電泳(GE)是常見的示例。與ICP-MS和DART-MS結合使用時,方法的組合尤為常見。

1、氣相色譜質譜法(GC-MS)

GC是一種分析/分離技術,其中將復雜的化合物混合物注入色譜柱中,并根據(jù)其相對沸點和對色譜柱的親和力進行分離。GC中使用的高溫使其不適合用于高分子量化合物(例如蛋白質),因為它們會使熱量變性。它非常適合用于石化,環(huán)境監(jiān)測和修復以及工業(yè)化學領域。樣品本質上可以是固體,液體或氣體。分離后,可以通過質譜技術(例如ICP-MS)分析化合物以進行鑒定,或使用EI或CI將其離子化,然后在ToF質量分析器17中進行分析。

2、液相色譜質譜法(LC-MS)

LC與氣相色譜相似,不同之處在于樣品現(xiàn)在處于液相狀態(tài)。將樣品溶解在溶劑中,然后注入到色譜柱中,該色譜柱由可溶化合物(流動相)和固相(固定相)組成。樣品成分與色譜柱固定相之間的相對親和力導致樣品成分分離,然后可以通過質譜檢測。由于流出物處于液相狀態(tài),因此這種分離技術非常適合與ICP-MS和ESI-MS方法結合使用,但也發(fā)現(xiàn)與離子阱和Orbitrap質譜儀相關。

3、交聯(lián)質譜(XL-MS)

了解多蛋白復合物的結構和組織對于了解細胞功能至關重要?;瘜W交聯(lián)與質譜聯(lián)用(XL-MS)是一種方法,可與諸如低溫電子顯微鏡(cryo-EM)和X射線晶體學之類的結構生物學技術互補,但可提供較低分辨率的結構信息。在XL-MS中,蛋白質或蛋白質復合物用交聯(lián)劑處理,該交聯(lián)劑會在蛋白質中的特定官能團之間引入共價鍵。然后將交聯(lián)的蛋白質用分解該蛋白質的酶消化,并通過LC-MS方法分析所得混合物,以鑒定交聯(lián)的肽并確定其序列。交叉鏈接的位置提供了有關正在研究的系統(tǒng)的結構信息。但是,解釋很復雜,因為以這種方式制備的樣品比非交聯(lián)蛋白的消化物包含的獨特化學種類要多得多。潛在的交聯(lián)肽的數(shù)目隨序列長度二次增加。盡管如此,XL-MS還是一個有用的工具,可幫助開發(fā)蛋白質-蛋白質相互作用的結構模型。

4、氫交換質譜(HX-MS)

氫交換質譜(HX-MS)的目標類似于XL-MS的目標–研究多蛋白復合物,尤其是蛋白結構和動力學。HX-MS的優(yōu)勢包括以下事實:它可以探測溶液中蛋白質的結構,因此無需結晶;它僅需少量樣品(500-1,000皮摩爾);可以研究難以純化的蛋白質,并且可以揭示結構和動力學隨時間的變化。HX-MS利用化學反應,使蛋白質中的某些H原子與溶液中的H原子連續(xù)交換。如果將H2O水溶液用重水(D2O)代替,則可以進行此交換過程。特別地,與氨基酸主鏈N原子鍵合的H(也稱為主鏈酰胺H)可用于探測蛋白質結構。H與D的交換完成后,可以通過MS分析樣品,以提供有關具有小分子結合,蛋白質折疊的蛋白質結構變化的信息,或有關未結晶或不適合其他結構生物學的蛋白質結構的信息方法。

5、基質輔助激光解吸/電離質譜成像(MALDI-MSI)

MALDI-TOF不僅是MS分析的出色方法,而且還能夠通過逐步掃描平臺,在重復發(fā)射激光的情況下連續(xù)掃描平臺或通過掃描激光束來生成圖像。這項技術稱為基質輔助激光解吸/電離質譜成像(MALDI-MSI)。所得到的圖像可以以50-200mm之間的空間分辨率提供有關大型組織切片的大量信息。由于MALDI是一種軟電離技術,因此分子信息得以保留,因此不需要像熒光顯微鏡那樣標記感興趣的化合物進行檢測。因此,它提供了“無標簽”成像的方法。

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